Prévalence du Parvovirus B et de l’ADN du Bocavirus Humain dans le Cœur des Patients sans Preuve de Cardiomyopathie ou Myocardite Dilatée

Bien que l’ADN du parvovirus B BV soit fréquemment détecté chez les patients atteints de cardiomyopathie dilatée ou de myocardite, la question de savoir si le parvovirus provoque la maladie est discutable, car même chez les individus sains, le virus persiste dans divers tissus. et la quantité d’ADN BV et HBoV dans les tissus cardiaques des patients qui ne présentaient pas de cardiopathies virales et analysaient si la séroprévalence correspondait à la prévalence de l’ADN dans le cœur. Des échantillons de tissu cardiaque et de sérum de l’oreillette gauche ont été prélevés chez des patients Les immunoglobulines IgG et IgM sériques contre les protéines codées par BV et HBoV ont été détectées par immunoabsorption enzymatique et immunoblotting BV et les concentrations d’ADN HBoV ont été déterminées par PCR quantitative en temps réel PCR dans les échantillons de tissu cardiaque et de sérum PCR nested pour VP , K et GT ont identifié les génotypes BVResultsThe La prévalence de l’IgG sérique spécifique de BV et HBoV était respectivement de% et% De tous les patients,% présentaient de l’ADN BV dans les tissus cardiaques et% présentaient une faible virémie BV, alors que seulement% des échantillons de tissu cardiaque et aucun du sérum échantillons démontrés ADN HBoV La sensibilité du test sérologique BV pour l’ADN BV dans les échantillons cardiaques était% intervalle de confiance, – Spécificité était% intervalle de confiance, -, et la valeur prédictive positive était% intervalle de confiance, – génotypes BV et étaient présents en% et% Conclusions Nos données suggèrent que BV mais pas HBoV démontre une persistance à vie dans le coeur La détection de l’ADN BV dans le tissu cardiaque n’a montré aucune corrélation avec les symptômes cliniques Nous recommandons fortement que les tests sérologiques devenir une procédure standardisée pour de futures études, afin d’obtenir des données représentatives concernant la prévalence de BV dans le cœur

Parvovirus B BV et Bocavirus humain HBoV sont des membres de la Parvoviridae BV provoque érythème infectieux, anémie aplasique transitoire, et hydrops fetalis et est associée à l’arthrite, l’hépatite et les syndromes vascularisant HBoV provoque des maladies respiratoires chez les enfants et les nourrissons -] Plus de% de la population adulte allemande a été séropositive à la fois pour BV et HBoV Bien qu’aucune information n’est disponible sur le tropisme cellulaire de HBoV, BV infecte les cellules progénitrices érythroïdes de la moelle osseuse via l’adsorption à l’antigène P du groupe sanguin Le coeur est un point clé dans l’étude des maladies associées à la BV, car l’ADN BV se trouve dans le cœur des patients atteints de myocardite aiguë, de cardiomyopathie dilatée et de cardiomyopathie péripartum . discutable, parce que l’ADN BV est trouvé dans divers tissus d’adultes en bonne santé et se trouve également dans le myocarde des patients sans cardiomyopathie ou myocardite En outre, un récent stu dy n’a trouvé aucune différence dans la réponse immunitaire médiée par les lymphocytes T ou dans les paramètres sérologiques des patients atteints de myocardite ou de cardiomyopathie dilatée avec un ADN BV détectable dans le myocarde, comparé à des individus sains Que la persistance de l’ADN viral dans les tissus BV ou peut également être observé avec d’autres parvovirus humains n’est pas connu. Le but de cette étude était d’analyser la prévalence de l’ADN parvoviral dans le tissu cardiaque provenant de patients qui ne présentaient pas de maladies myocardiques associées à des pathogènes viraux. des patients étudiés peuvent être considérés comme représentant la population adulte normale. Les données fournissent d’autres preuves que l’ADN BV persiste généralement asymptomatiquement dans le tissu myocardique

Méthodes

Patients De décembre à mars, nous avons obtenu – g de tissu de l’oreillette gauche de patients ayant subi une chirurgie à cœur ouvert. Les interventions chirurgicales comprenaient le remplacement ou la correction valvulaire et le pontage aorto-coronarien, seuls ou en association. étude Le tissu a été congelé dans l’azote liquide immédiatement après son prélèvement et stocké à-° C jusqu’à la préparation de l’acide nucléique. Tous les patients ont été soumis à une échocardiographie de manière standard et à une angiographie ventriculaire gauche. le comité d’éthique local a approuvé l’étude, et tous les patients ont donné leur consentement éclairé pour que les données soient incluses dans l’étude

Tableau View largeTéléchargement slidePatient CharacteristicsTable Voir grandDownload slideCaractéristiques du patientDétection d’anticorps spécifiques de BV et HBoV Des anticorps IgG et IgM spécifiques d’immunoglobulines BV ont été détectés dans des échantillons de sérum à l’aide du test immunoenzymatique normalisé ELISA. RecomLine de dosage de Biotrin International et Western Blot; Mikrogen GmbH selon les instructions du fabricant Des IgG et IgM spécifiques du HBoV ont été détectés par ELISA comme décrit ailleurs Préparation et détection de l’ADN BV et HBoV L’ADN extrait des échantillons sériques et du tissu cardiaque de l’oreillette gauche a été réalisé avec le QIAamp DNA Mini Kit Qiagen Brièvement, des échantillons de tissus ont été hachés et ~ mg de tissu a été transféré dans des microcentrifugeuses contenant du tampon de lyse et de la protéinase K Une lyse tissulaire a été réalisée à ° C pendant une nuit. Les séquences d’amorces et de sondes pour la PCR BV pour la détection combinatoire des génotypes BV – étaient comme décrit ailleurs Pour amplifier les séquences du génome de HBoV, les amorces suivantes ont été analysées dans des ADN de duplicateBV et HBoV. et des sondes ont été utilisées: amorce directe, nucleotides ‘-CCA-CCTATCGTCTTGCAC-TGC-‘; amorce inverse, nucléotides -TTT-TCCCCGATGTACTCT-CCC-, sonde FAM-TCG-AGACCTCAGACCAAGTGATGA-AG-ACG-TAMRA, positions nucléotidiques selon le numéro d’accès GenBank DQ Une phase initiale de dénaturation de min à ° C était suivi de cycles à ° C s et ° Cmin Les valeurs quantitatives pour l’ADN BV et HBoV ont été calculées à partir de la détection simultanée de dilutions en série de fragments cibles de PCR clonés, qui ont été utilisés pour générer des courbes standard. Utilisation de PCR quantitative ciblant une région chromosomique non codante en amont du gène humain pyruvate déshydrogénase ß Détection de l’analyse génotypique BV génotypes BV réalisée à l’Institut Haartman de virologie Helsinki, Finlande A nouveau, l’ADN de mg échantillons de myocarde a été isolé à l’aide du QIAmp DNA Mini Kit Tous les échantillons ont été analysés par PCR nested: VP PCR a été utilisé pour amplifier les génotypes BV et, K PCR a été utilisé pour amplifier le génotype, et GT PCR a été utilisé pour amplifier le génotype Les sensibilités de VP PCR et K PCR ont été mesurées ailleurs sensibilité, copies / réaction La sensibilité de GT PCR a été mesurée avec une série de dilution du plasmide clone V, résultant en Copies / réaction également Les amorces pour VP et K PCR ont été décrites ailleurs Pour GT PCR nichée, les séquences d’amorce externe étaient les suivantes: amorce sens, ‘-ACC-CATTTTCTGTGTTAACT-TGT-‘; amorce inverse, ‘-GCG-AGCAACTAAGTCAAA-TAA-‘ Les séquences d’amorce interne avant et inverse étaient respectivement ‘-CAG-TGACAAATTTGC-CC-AG-GAC-‘ et ‘-AAG-GATTATCTAAAGAA-ATG-‘, respectivement Les produits de PCR ont été séparés par électrophorèse en gel d’agarose% pour VP et% pour K et GT, et les produits ont été détectés par coloration au bromure d’éthidiumAnalyse statistique Les variables discrètes sont exprimées en pourcentages et les variables continues sont exprimées en moyennes ± écart type SD, sauf indication contraire. par χtest Pour les données qui n’étaient pas distribuées normalement, le test U de Mann-Whitney a été utilisé. Sensibilités, spécificités, valeurs prédictives positives et valeurs prédictives négatives avec des intervalles de confiance% précis Les CI ont été calculés pour les marqueurs simples et composites P de & lt; ont été jugés statistiquement significatifs Pour l’analyse statistique, le logiciel statistique JMP, version SAS Institute, a été utilisé

Résultats

Population étudiée Au total, les patients blancs ont subi une chirurgie cardiaque hommes et femmes; âge moyen [± écart-type], ± années; gamme, – années de ceux-ci, étaient âgés & lt; années, les patients étaient âgés de – ans, les patients étaient âgés de – ans, et les patients avaient ⩾ ans La fraction d ‘éjection moyenne ± ET était de% ±%; la fraction d’éjection était>% chez les patients et en dessous de% chez les patients L’insuffisance cardiaque était symptomatique chez% des patients; Tableau III Aucun patient n’avait de cardiomyopathie ou de myocarditeAnalyse du sérum pour l’ADN viral et les anticorps spécifiques au virus ELISA et immunoblot ont été utilisés pour détecter les anticorps spécifiques de la BV dans le sérum Par ELISA seul, la séroprévalence pour tous les patients était%, et des patients positifs pour l’ADN BV dans le coeur, étaient IgG positifs La sensibilité des tests sérologiques pour l’ADN BV dans le coeur était% CI, -, la spécificité était% CI, -, valeur prédictive positive était% CI , -, et la valeur prédictive négative était% CI, – La combinaison des données ELISA avec celles de l’immunoblot, la séroprévalence augmentée à%, et des patients positifs pour l’ADN BV, était IgG positive La sensibilité résultante était% CI, -, la spécificité était% CI , -, la valeur prédictive positive était% CI, -, et la valeur prédictive négative était% CI, – Table

Analyse de la tableAnalyse du Parvovirus B BV et du Bocavirus Humain HBoV ADN et des Anticorps SpécifiquesDe tous les individus BV-séropositifs,% avaient des anticorps contre les épitopes conformationnels des protéines de la capside virale Anticorps contre Des épitopes VP linéaires ont été trouvés en% d’échantillons sériques Des anticorps contre la protéine non structurelle virale NS ont été détectés chez% des patients Des IgM spécifiques VP ont été détectées chez le patient En% des patients, faibles niveaux d’ADN BV jusqu’à équivalents génome [geq] / mL ont été observés dans des échantillons de sérum Aucun des patients n’étant IgM positif, cette situation est révélatrice d’une faible production persistante de BV et a été observée chez des individus avec et sans symptômes En% des échantillons de sérum, les anticorps IgG spécifiques de HBoV étaient ont été détectés, mais ni l’IgM spécifique de HBoV ni l’ADN de HBoV n’ont été observés dans aucun des échantillons de sérum. Détection de BV et HBoV DN A dans le cœur Au total,% des patients avaient un ADN BV détecté dans le coeur Le nombre moyen ± SD de geq par million de cellules de tissu cardiaque geq / × cellules était ±, et la concentration maximale dans notre population étudiée était geq / x cellules Environ la moitié des patients avaient des valeurs & lt; geq / × cells Figure La quantité d’ADN BV n’était pas significativement différente chez les patients avec une fraction d’éjection <%, comparée aux patients avec une fraction d'éjection de ⩾% P =, et la même fréquence de patients était positive pour l'ADN BV dans les deux groupes P = La fréquence des patients positifs pour l'ADN de la BV n'était pas significativement différente avec l'augmentation de l'âge des patients âgés de & lt; années, de positif; - années, de positif; - années, de positif; et ⩾ ans, de positif

Figure Vue largeDownload slideDistribution des patients avec différents niveaux de parvovirus B BV équivalents génomiques par million de cellules dans le coeur, mesurée par réaction en chaîne de polymérase quantitativeFigure View largeDownload slideDistribution des patients avec différents niveaux de parvovirus B BV équivalents génomiques par million de cellules dans le coeur, mesuré par réaction quantitative en chaîne de la polyméraseHBoV ADN a été trouvé dans le tissu cardiaque de% des patients L’âge moyen ± écart-type des patients positifs pour l’ADN du HBoV était similaire à celui des patients HBoV ADN-négatifs ± vs ± ans; P = Les patients ayant un ADN HBoV détectable dans le myocarde présentaient des valeurs de fraction d’éjection moyenne similaires ± écart-type par rapport aux patients sans ADN HBoV détectable% ±% vs% ±%; P = Détection des génotypes BV dans le coeur Lorsque le tissu cardiaque a été examiné pour l’ADN BV humain, les échantillons étaient positifs par VP VP PCR Seuls de ces échantillons étaient négatifs pour K qui indiquait qu’ils contenaient du génotype Les autres échantillons avaient à la fois VP et K; par conséquent, ils contenaient ADN génotype Tous les patients qui ont été jugés positifs pour l’ADN BV par la PCR quantitative spécifique pour les génotypes – à Regensburg Allemagne a confirmé des résultats positifs à l’institut à Helsinki Cette vérification dans différents laboratoires a été effectuée pour exclure la contamination croisée artefacts Les résultats incluaient des échantillons avec un faible nombre de copies ayant donné des résultats négatifs avec l’approche combinatoire de détection d’ADN BV utilisée par le groupe en Allemagne. Aucun échantillon n’étant positif pour GT, le génotype était absent de tous les échantillons de tissus. vieillir; dans le groupe de patients âgés de & lt; années,% étaient positifs pour le génotype et% pour le génotype Parmi les sujets âgés, le génotype était positif pour le génotype et le génotype pour le génotype, les génotypes étaient positifs pour le génotype et le génotype pour le génotype Figure Tous les patients âgés de ⩾ ans étaient positifs pour le génotype

Figure Vue largeDispositif de distribution des génotypes du parvovirus B dans le myocarde obtenus à partir du tissu de l’oreillette gauche. Vue détailléeDistribution dépendante de la distribution des génotypes du parvovirus B dans le myocarde obtenus à partir du tissu de l’oreillette gauche.

Discussion

Plusieurs études antérieures ont rapporté une fréquence plus faible de détection d’ADN BV dans les biopsies endomyocardiques de patients atteints de cardiomyopathie inflammatoire ou de myocardite [,,], par rapport à nos résultats. Ceci n’est pas surprenant compte tenu de la très petite taille des biopsies endomyocardiques Selon les résultats obtenus par la quantification du gène humain de la pyruvate déshydrogénase ß, les échantillons comprenaient une moyenne de x cellules compte tenu du faible nombre de GEqs par cellule, L’analyse des biopsies endomyocardiques obtenues à partir de cœurs malades à forte teneur en tissus fibreux peut entraîner une erreur d’échantillonnage accrue. Nos résultats indiquent que l’ADN de la BV est présent chez presque tous les individus ayant une infection BV antérieure, les biopsies endomyocardiques considéré avec scepticisme Nos données sont soutenues par une découverte récente que% de l Les échantillons tissulaires ventriculaires sont également positifs pour l’ADN lorsque les sujets sont séropositifs Cette étude a également montré qu’il n’y a pas de différence entre le tissu de l’oreillette gauche et le ventricule gauche en ce qui concerne la persistance virale. des tests sérologiques pour toutes les études futures, pour garantir une norme de qualité et pour éviter toute mauvaise interprétation des donnéesOn peut se demander si la présence d’ADN BV dans le tissu myocardique provoque la maladie sous-jacente ou s’il s’agit d’une persistance virale pathogéniquement non liée. Si les données sont basées exclusivement sur l’analyse qualitative de l’ADN, l’interprétation est délicate. Les résultats présentés ici expliquent l’observation selon laquelle la présence de l’ADN BV ne permet pas de prédire les résultats des patients avec myocardite soupçonnée ou cardiomyopathie dilatée Copiez les nombres jusqu’à BV geq / × cellules, le hig Nous avons constaté que les maladies aiguës associées aux infections à VB, telles que l’hydrops fœtale, étaient significativement plus élevées . Il a été suggéré que la BV peut induire une myocardite aiguë qui simule cliniquement cardiologie ischémique et est responsable du vasospasme des artères coronaires Par conséquent, il serait très instructif d’évaluer les concentrations d’ADN de BV comme mesure de la charge virale dans de futures études ou présentations de cas. Cependant, nos données n’excluent une exposition primaire à la BV pourrait conduire à une maladie cardiaque aiguë Une publication récente a déduit que le génotype de la BV était prédominant chez les patients atteints de cardiomyopathie dilatée et était le seul génotype trouvé dans le tissu cardiaque des patients âgés de & gt; Les auteurs ont spéculé que le génotype pourrait déclencher une réaction auto-immune plus sévère Chez nos patients, le génotype était prédominant Cependant, nous avons trouvé le génotype chez les patients avec génotype détecté. Une autre étude des biopsies non cardiaques a également démontré un génotype chez les patients âgés et chez tous les patients nés après . Il semble donc improbable que différents sous-types viraux suscitent des réponses immunologiques différentes. Plus probable, l’association apparente du génotype avec une fonction ventriculaire gauche médiocre Cette hypothèse est corroborée par des données de neutralisation in vitro utilisant des échantillons de sérum provenant de sujets infectés par le génotype BV, qui inhibaient également l’infection génotypique. En outre, % Comme les données sur les réactions immunitaires cellulaires contre les VP et VP du génotype n’ont pas été publiées, il est difficile de savoir si les lymphocytes T peuvent être de même réactivité croisée. Cependant, les génotypes BV ont été transcrits avec une efficacité comparable dans divers types cellulaires, suggérant un tropisme similaire Ces études précédentes et nos propres résultats, qui excluent les erreurs d’échantillonnage, indiquent qu’il n’y a pas de différence de génotype dans la pathobiologie des infections à BV. Nous avons trouvé une séroprévalence élevée de BV, qui correspondait à la prévalence cardiaque de l’ADN de BV En revanche, aucune persistance de l’ADN de HBoV n’a été observée, suggérant que la persistance de l’ADN dans le tissu cardiaque est une caractéristique de BV Nos résultats impliquent que l’ADN BV persistant n’est pas pathogène Sur cette base, nous recommandons fortement le sérolog Tests cliniques et PCR quantitative pour de futures études Une interprétation correcte des données aidera à élucider toute signification clinique de l’ADN viral détecté dans le tissu cardiaque

Remerciements

Nous remercions le Dr M Meredyth-Stewart, le Prof. Klaus Hedman et le Prof. Maria Söderlund-Venermo pour avoir révisé le manuscrit et Mme Anette Rohrhofer pour son excellente assistance technique. Soutien financier Ce travail a été partiellement soutenu par la Deutsche Forschungsgemeinschaft Mo / Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits