Relation entre la virémie de l’herpèsvirus associé au KS du sarcome de Kaposi et la maladie de KS au Zimbabwe

La relation entre la virémie KSHV associée au sarcome de Kaposi et la maladie de KSHV a été étudiée chez des sujets traités à Harare, Zimbabwe. Les sujets ont été regroupés selon les résultats des tests sérologiques de type HIV, KS et KSHV. était associée à KS concomitante et à l’infection par le VIH SIDA-KS; P & lt; et stade clinique du SIDA-KS P = Plasma Les taux d’ADN du KSHV étaient plus élevés dans le KS-SIDA que dans le KS-VIH séronégatif apparié P = Le taux d’ADN KSHV plasmatique n’était pas associé à l’âge, au sexe, aux symptômes systémiques ni au nombre de lymphocytes CD. les concentrations d’ADN KSHV des cellules mononucléées du sang périphérique étaient linéairement liées r =; P & lt; Ces résultats apportent la preuve que la virémie KSHV est fréquente dans le stade avancé du SIDA-KS au Zimbabwe et suggèrent une relation entre la réplication lytique du KSHV et l’infection par le VIH non traitée.

Avant le début de l’épidémie de SIDA, Kaposi sarcome KS était un cancer rare chez les hommes zimbabwéens et un cancer rare chez les femmes zimbabwéennes Parallèlement à la propagation du VIH au Zimbabwe, entre et l’incidence de KS a augmenté chez les hommes zimbabwéens et les femmes zimbabwéennes Les Zimbabwéens atteints du SIDA-KS ont généralement un fardeau tumoral élevé, une progression rapide de la maladie et une espérance de vie médiane de & lt; CL Olweny et al., communication personnelle La chimiothérapie conventionnelle et / ou la radiothérapie améliore la qualité de vie des patients zimbabwéens atteints du SIDA mais n’affecte pas leur survie. Une meilleure compréhension des facteurs contribuant à la pathogenèse du SK est nécessaire si des stratégies plus efficaces pour prévenir et traiter les KS au Zimbabwe et dans d’autres pays africains doivent être développés comme d’autres herpèsvirus, l’herpèsvirus KS-associé KSHV; Des études antérieures ont fourni des preuves d’un lien entre la KSHV et la réplication du VIH et suggéré un modèle dans lequel la réplication lytique de KSHV est importante pour la pathogenèse du KS. D’abord, bien que l’expression du gène KSHV dans la plupart des cas. Les cellules tumorales KSH sont limitées au programme du gène latent , les PBMC infectées par le KSHV des personnes atteintes du SIDA-KS ont des signes de réplication lytique du KSHV Deuxièmement, le traitement par antiviraux inhibant la réplication lytique du KSHV dans les cellules cultivées avec une diminution du risque de développement du SK chez les personnes à risque élevé de KS et de régression des tumeurs chez les personnes ayant une maladie du SK établie Troisièmement, le risque de KSHV est plus élevé après l’acquisition d’une nouvelle infection par le VIH. -infected persons Enfin, le traitement du SIDA-KS avec les antirétroviraux est corrélé avec la virémie KSHV réduite Si la réplication lytique KSHV est importante pour la pathogenèse du KS, alors KSHV vir Emia devrait être associée à la maladie du SIDA-KS A l’appui de cette hypothèse, nous avons précédemment rapporté des taux élevés d’ADN KSHV acellulaire résistant à la DNase chez les Zimbabwéens atteints de KS-SIDA . Cependant, l’ADN KSHV plasmatique n’était pas corrélé avec KS. stade clinique ou marqueurs de la maladie du VIH Comme notre étude antérieure n’évaluait qu’un petit nombre de sujets, dont la plupart avaient un KS-SIDA avancé, les relations potentielles entre la virémie KSHV, l’infection par le VIH et la KS ne pouvaient être exclues. a été entreprise pour tester l’hypothèse que l’ADN KSHV acellulaire dans le compartiment circulatoire est lié à la maladie du SIDA-KS

Sujets et méthodes

Instructions pour l’obtention du plasma et des PBMC Le plasma a été centrifugé à g pendant min pour éliminer les débris cellulaires et conservé à – ° C L’ADN présent dans – mL de plasma clarifié a été extrait et purifié avec le QIAamp Blood Kit après addition de μg de saumon L’ADN des spermatozoïdes a été lavé dans du PBS et stocké à – ° C sous la forme d’un culot sec de cellules. Les culots cellulaires ont été remis en suspension dans des pL de PBS, et l’ADN a été extrait et purifié avec le kit QIAamp Blood Qiagen. Toutes les extractions d’ADN et les purifications ont été effectuées avec des pipettes résistantes aux aérosols dans une hotte de confinement située dans une salle de préparation dédiée. Les produits de PCR n’étaient pas autorisés dans la salle de préparation, Tous les membres du personnel portaient des blouses et des gants lorsqu’ils travaillaient à l’intérieur. Après la purification de l’ADN, les échantillons ont été retirés de la salle de préparation et l’analyse par PCR a été effectuée dans une salle séparée. La quantité d’ADN de KSHV présente dans les préparations d’ADN obtenues à partir de PBMC ou de plasma a été déterminée par amplification PCR en temps réel d’une région conservée du gène de capside minoritaire de l’ORF, comme décrit ailleurs . relation linéaire entre la valeur du CT du cycle seuil pour les étalons et le logarithme du nombre de copies d’ADN de la capside mineure r = pour chaque test Si l’ADN de KSHV mesuré était ⩾ copie, la PCR a été considérée comme positive pour tous les tests inclus. Dans tous les dosages, la fluorescence mesurée des contrôles négatifs n’a pas dépassé le seuil après les cycles PCR. Détection qualitative de l’ADN de KSHV. Détection qualitative de l’ADN de KSHV utilisé comme amplification PCR et hybridation par transfert de Southern, comme décrit ailleurs [ ] L’amplification a été effectuée dans des mélanges -μL contenant μL d’ADN extrait, U de PfuI Stratagene, μM chaque dNTP, et μ M chaque amorce, KS ‘-AGCCGAAAGGATTCCACCAT-‘ et ‘-TCCTGTTTGTCTACGTCCAG-‘ , dans le tampon PfuI Les mélanges réactionnels Stratagene Duplicate ont été amplifiés pour les cycles Les produits de PCR ont été séparés par électrophorèse en% gels d’agarose et transférés sur des membranes de nylon Les membranes ont été hybridées avec la digoxigénine Sonde étiquetée ‘-CCATGGTCGTGCCGCAGCA-‘ Une sonde liée a été détectée avec un anticorps anti-digoxigénine conjugué à la phosphatase alcaline Boehringer Mannheim et un substrat chimiluminescent Tropix Chaque test incluait des réactions sans ADN comme témoins négatifs et des réactions avec l’ADN KSHV comme témoins positifs. Les tests de PCR pour la détection qualitative de l’ADN de l’ORF ont été réalisés au laboratoire de virologie clinique de l’hôpital de l’Université du Colorado par du personnel aveuglé par les résultats des tests PCR quantitatifs. Analyse phylogénétique de KSHV ORF K KSHV ORF K ADN était amplif par électrophorèse sur gel d’agarose colorée à l’éthidium, vérifiée par la PCR avec des ensembles d’amorces nichés, comme décrit par ailleurs. La présence du produit de PCR-Kp-K attendu a été purifiée Wizard Prep; Promega et directement analysé par analyse de séquence d’ADN automatisée Pour un sujet, des clones moléculaires ont été générés par ligature du produit de PCR dans pCR-TOPO Invitrogen et analysés par analyse de séquence d’ADN automatisée pour chaque produit de PCR ou clone moléculaire. et VR et VR ont été obtenus avec des amorces sens et antisens Les séquences d’ADN ont été éditées manuellement avec Sequencher Gene Codes et alignées avec CustalW in Bioedit disponible sur: http: // wwwmbioncsuedu / BioEdit / bioedithtml Les arbres phylogénétiques inférés ont été construits par voisin-join / UPGMA Les séquences de nucléotides K VR-VR des isolats KSHV de tous les principaux sous-types A, B et C disponibles via Genbank ont ​​été incorporées dans l’arbre phylogénétique déduit. Les analyses bootstrap ont été réalisées avec le logiciel Seqboot Paquet Phylip disponible sur: http: // evolutiongeneticswashingtonedu / phyliphtml Les méthodes statistiques ont été utilisées. StatView Abacus Concepts et supposé un niveau de signification unilatérale de P = En raison de la distribution non normalisée de l’ADN plasmatique de KSHV, des tests non paramétriques ont été effectués. utilisé le cas échéant Les caractéristiques intergroupes ont été comparées en utilisant le test exact de Fisher pour les groupes de variables catégoriques, le test for pour l’indépendance de plusieurs groupes de variables catégoriques, le test de Wilcoxon ou le test de Mann-Whitney pour les groupes de variables continues. Test de Kruskal-Wallis pour plusieurs groupes de variables continues Les corrélations ont été évaluées avec le test de rang de Spearman. La régression par les moindres carrés a été utilisée pour décrire la relation entre le plasma et l’ADN de KSHV des PBMC.

Résultats

Caractéristiques du sujet Un total de sujets avec KS possible ont été recrutés à la clinique ambulatoire de l’hôpital de Parirenyatwa. Quarante sujets ont été exclus de l’analyse parce que les résultats des tests VIH sérologiques ou histologiques des lésions suspectées de KS n’ont pas pu être vérifiés. Les sujets ont été regroupés selon les résultats des tests sérologiques VIH et histopathologiques des lésions KS suspectées. Le KS a été confirmé par un test histologique chez les sujets: les sujets étaient séropositifs pour le SIDA-KS, et les sujets avaient des antécédents de séropositivité. KSHV endémique séronégatif Vingt-cinq sujets ont été jugés non séropositifs au VIH et séropositifs pour le VIH et associés à une virémie séronégative. KSHV a été détecté dans le sang périphérique par amplification PCR en temps réel de l’ORF ADN pour% des sujets La spécificité de l’amplification par PCR en temps réel pour la détection de l’ADN de l’ORF a été évaluée par PCR amplifi cation avec un ensemble alternatif d’amorces ORF, suivi de la détection du produit de PCR par des produits de PCR d’hybridation par transfert de Southern chez des sujets ayant une large gamme de charges d’ADN KSHV plasmatiques & lt; à & gt; Dans ce sous-ensemble de sujets, la concordance entre la PCR ORF en temps réel et le test qualitatif PCR / Southern blot pour la détection de l’ADN de KSHV était de% Ainsi, les résultats du La prévalence et l’ampleur de l’ADN de KSHV sans cellule étaient fortement associées à l’ADN du KSHV sans cellules. L’ADN de KSHV sans cellules a été détecté chez des% des sujets avec médiane du SIDA-KS, copies / ml; gamme & lt; à & gt; copies / mL Dans les analyses univariées de patients atteints du SIDA-KS, la concentration plasmatique d’ADN KSHV n’était pas associée à l’âge P =, au sexe P =, à la présence de symptômes systémiques, aux sueurs nocturnes ou à la perte de poids; P =, ou nombre de lymphocytes CD CD Cependant, à la fois la prévalence et l’ampleur de l’ADN plasmatique de KSHV ont été associées à la figure clinique du stade SIDA-KS

Figure Vue largeDownload slideRelationship de l’ADN KSHV de l’herpèsvirus associé au sarcome de Kaposi sans cellule dans le plasma ou le sérum à la présence ou l’absence de maladie KS et d’infection par le VIH parmi les Zimbabwéens A, Prévalence de l’ADN KSHV par groupe P & lt; , χ test Le nombre de sujets dans chaque groupe est indiqué au-dessus des barres B, niveaux d’ADN KSHV sans cellule P & lt; , Test de Kruskal-Wallis Les barres horizontales de valeur médiane, les percentiles th et th centiles, les barres d’erreur percentiles th et th et les percentiles noirs th et th percentiles sont indiqués pour chaque groupe La ligne horizontale indique la limite inférieure de détection KSHV DNA copies / mL Les résultats des tests sérologiques VIH, des tests sérologiques de l’antigène nucléaire KSHV associés à la latence et du diagnostic KS sont indiqués au bas de la page. ViewRelation de l’ADN KSHV de l’herpèsvirus associé au sarcome de Kaposi sans cellule dans le plasma ou le sérum en présence ou en absence de KS maladie et infection par le VIH chez les Zimbabwéens A, Prévalence de l’ADN de KSHV par le groupe P & lt; , χ test Le nombre de sujets dans chaque groupe est indiqué au-dessus des barres B, niveaux d’ADN KSHV sans cellule P & lt; , Test de Kruskal-Wallis Les barres horizontales de valeur médiane, les percentiles th et th centiles, les barres d’erreur percentiles th et th et les percentiles noirs th et th percentiles sont indiqués pour chaque groupe La ligne horizontale indique la limite inférieure de détection KSHV DNA copies / mL Les résultats des tests sérologiques VIH, des tests sérologiques d’antigènes nucléaires associés à la latence KSHV et du diagnostic KS sont indiqués en bas

Figure Vue grandDownload slideRelationship of plasma Kaposi associé à l’herpèsvirus KSHV ADN charge à la numération lymphocytaire CD pour les Zimbabwéens atteints de SIDA-KS CD lymphocytes ont été obtenus pour les sujets atteints de SIDA-KS Spearman ρ =; P = Figure Voir grandDownload slideRelationship of plasma Kaposi associé à l’herpèsvirus KSHV ADN charge à la numération lymphocytaire CD pour les Zimbabwéens atteints de SIDA-KS CD lymphocytes ont été obtenus pour les sujets atteints de SIDA-KS Spearman ρ =; P =

Figure Vue largeDownload slideRelationship of plasma Kaposi associé à l’herpèsvirus KSHV DNA au stade clinique Zimbabwe-AIDS-KS Les données présentées concernent les sujets atteints du SIDA-KS pour lesquels le stade clinique KS a été déterminé A, La prévalence de l’ADN KSHV par groupe P =, χ tester; Le nombre de sujets dans chaque groupe est indiqué au-dessus des barres B, les niveaux d’ADN de KSHV sans cellules sont montrés P =, test de Kruskal-Wallis La valeur médiane des barres horizontales, des th et des percentiles des boîtes noires, Les barres d’erreur percentiles et th et les centiles percentiles noirs sont indiqués pour chaque groupe. La ligne horizontale indique la limite inférieure de détection Copies d’ADN KSHV / mL Le stade clinique KS est indiqué au bas de la figure. Vue détailléeDownloadation du sarcome plasmatique de Kaposi ADN du KSHV de l’herpèsvirus associé au stade clinique Zimbabwe-SIDA-KS Les données présentées concernent les sujets atteints de KS-SIDA pour lesquels le stade clinique du SK a été déterminé. A, La prévalence de l’ADN du KSHV par le test P =, group du groupe; Le nombre de sujets dans chaque groupe est indiqué au-dessus des barres B, les niveaux d’ADN de KSHV sans cellules sont montrés P =, test de Kruskal-Wallis La valeur médiane des barres horizontales, des th et des percentiles des boîtes noires, Les barres d’erreur percentiles et th et les centiles percentiles noirs sont indiqués pour chaque groupe La ligne horizontale indique la limite inférieure de détection Copies d’ADN KSHV / mL Le stade clinique KS est indiqué en basLa relation entre le plasma et les charges d’ADN de KSHV PBMC a été évaluée chez des sujets atteints de KS-SIDA au stade, au stade et au stade desquels des quantités adéquates d’ADN cellulaire ont été obtenues à partir de préparations de PBMC Parmi les sujets de ce sous-groupe, les concentrations plasmatiques et PBMC KSHV ont été associées au stade KS. et P =, respectivement Il y avait une relation linéaire significative entre les concentrations de KSHV dans le plasma et les PBMC qui couvrait une gamme de copies log / mL d’ADN KSHV plasmatique et de copies log / cellules de l’ADN KSHV associé aux cellules. figure La relation linéaire entre le plasma et l’ADN de KSHV de PBMC était similaire chez les sujets avec des copies de stade KS y = x log / mL; r =; P & lt; , stade KS y = x copies de log / mL; r =; P & lt; , et stade KS y = x log copies / mL; r =; P & lt;

Figure Vue largeTéléchargement du plasma et des PBMC Kaposi herpesvirus associé à l’herpès KSHV DNA Les données pour les sujets zimbabwéens avec KS-AIDS et KSHV suffisante ont été incluses dans l’analyse Ligne continue, ajustement des données par régression par les moindres carrés y = x log copies / mL; r =; P & lt; Lignes pointillées, IC% pour la régression Les valeurs inférieures à la limite de détection ont été incluses dans l’analyse et sont indiquées sur les axes X et YFigure View largeTéléchargement slideRelationship of plasma and PBMC Données sur l’ADN KSHV de l’herpèsvirus du sarcome de Kaposi chez des sujets zimbabwéens avec AIDS-KS et suffisamment d’ADN de KSHV PBMC ont été inclus dans l’analyse ligne continue, ajustement des données par régression par les moindres carrés y = x copies de log / mL; r =; P & lt; Lignes pointillées, IC% pour la régression Les valeurs inférieures à la limite de détection ont été incluses dans l’analyse et sont indiquées sur les axes X et Y. Aucune preuve de l’hétérogénéité génétique intrasujet KSHV La possibilité que les résultats de PCR en temps réel soient dus à l’échantillon La séquence nucléotidique VR-VR a été déterminée pour des échantillons de plasma appariés et de PBMC provenant de sujets zimbabwéens atteints de SIDA-KS. Tous les ORF K ont été déterminés par amplification PCR et analyse de séquence d’ADN des régions hautement variables de KSHV ORF K VR et VR. les séquences provenant de sujets zimbabwéens étaient uniques et lointaines par rapport à KSHV présent dans les lignées cellulaires PEL BCP-, BCBL-, BC- et BC- utilisées dans notre laboratoire Figure 4 Les séquences K du Zimbabwe étaient plus étroitement apparentées à un isolat ougandais précédemment désigné comme appartenant au sous-groupe A Les autres séquences K du Zimbabwe regroupées au sein du sous-groupe B La découverte selon laquelle les Zimbabwéens atteints du SIDA-KS étaient infectés par l’un ou l’autre sous-type e A ou B KSHV est cohérent avec les rapports antérieurs de la prévalence de ces sous-types dans d’autres populations africaines Dans tous les cas, la séquence nucléotidique K des échantillons de plasma appariés et PBMC était identique Aucune évidence d’hétérogénéité génétique intrasubject KSHV n’a été trouvée l’inspection de chromatogrammes séquentiels ou, dans un cas, l’analyse de séquences d’ADN de plusieurs clones moléculaires

Figure Vue largeTéléchargement du plasma zimbabwéen et des CMSP Herpèsvirus associé au sarcome de Kaposi KSHV à d’autres souches de KSHV L’arbre phylogénétique a été déduit par une méthode de jointure voisine. Gras indique des séquences de photogrammes à lecture ouverte provenant d’échantillons de plasma et de PBMC du Zimbabwe appariés. Les valeurs de bootstrap de Genbank sont représentées par le pourcentage de fois que les groupes distaux du nœud sont apparus dans des arborescences répétées. Vue de l’écran largeTéléchargement du plasma zimbabwéen et des PBMC L’herpèsvirus KSHV associé au sarcome de Kaposi à d’autres souches KSHV L’arbre phylogénétique a été déduit par une méthode voisine indique les séquences du cadre K en lecture ouverte des échantillons de plasma et PBMC du Zimbabwe appariés Les séquences de référence ont été obtenues à partir de Genbank Les valeurs bootstrap sont exprimées en pourcentage du nombre de fois où les groupes distaux se rencontrent dans les réplicats. analyse initiale a suggéré que K La virémie SHV était significativement plus importante chez les sujets atteints de KS-SIDA que chez les sujets avec KS endémique séronégatif au KS; Cependant, comme l’ADN KSHV acellulaire était associé au stade clinique KS et au KSHV des PBMC, les comparaisons directes entre les groupes KS VIH séronégatifs endémiques et SIDA-KS VIH-séropositifs sont potentiellement trompeuses. Nous avons donc comparé l’ADN plasmatique du KSHV chez les sujets avec KS endémique au stade et au stade chez les sujets atteints du SIDA-KS qui avaient un stade ou une maladie au stade et au stade Dans cette comparaison, l’ADN du KSHV plasmatique était plus élevé dans le groupe SIDA-KS & lt; vs copies / mL; P & lt; Afin de mieux contrôler les différences dans le stade clinique KS et l’ADN de KSHV des PBMC dans les groupes endémique et KSHV-SIDA, une comparaison appariée a été effectuée. Les sujets atteints de KS endémique ont été appariés à des sujets atteints du KS-SIDA d’abord par le stade KS. Les sujets du groupe KS endémique avec maladie stade ont été jumelés avec les sujets atteints du SIDA-KS qui présentaient une maladie stade. Il n’y avait que des sujets avec stade SIDA-KS dans notre population étudiée, l’appariement par l’ADN des PBMC KSHV n’était pas possible. KSHV DNA comparé aux sujets ayant un KS endémique, les sujets appariés avec AIDS-KS étaient significativement plus jeunes, avaient moins de lymphocytes CD, et avaient une plus grande table de niveau d’ADN KSHV plasmatique

Table View largeTélécharge Comparaison comparée de l’endémie zoosanitaire du Zimbabwe et du sarcome du SIDA-Kaposi KSTable View largeTéléchargement de diapositives Comparaison comparée de l’endémie zoosanitaire du Zimbabwe et du sarcome du SIDA-Kaposi KS

Discussion

Dans la présente étude, l’ADN KSHV sans cellule dans le sang périphérique était commun chez les personnes atteintes du SIDA-KS. Comme les techniques de culture du KSHV infectieux à partir des échantillons cliniques ne sont pas disponibles, nous n’avons pas pu déterminer la relation entre le titre viral infectieux et le plasma. ADN KSHV ou maladie KS Cependant, des études antérieures ont démontré que l’ADN du KSHV plasmatique est résistant à la dégradation de la DNase et est corrélé avec les titres d’anticorps anti-KSHV lytiques, mais non latents . Une mesure des virions KSHV acellulaires et un marqueur de réplication virale lytique Chez les personnes atteintes de SIDA-KS dans la présente étude, la virémie KSHV a été associée au stade clinique KS Parce que les critères de stadification clinique utilisés dans notre étude sont une mesure brute de la tumeur KS fardeau, cette découverte implique que la charge tumorale de KS et la réplication lytique de KSHV sont directement liées. Notre constatation que l’ADN de KSHV associé à la cellule était également associée au KS La relation entre le plasma et PBMC KSHV ADN chez les sujets atteints de KS-sida dans le présent chiffre d’étude était similaire à la relation rapportée ailleurs pour un plus petit groupe de sujets Notre constat que la relation entre l’ADN KSHV cellulaire et associé était similaire chez les sujets avec stade de maladie cutanée limitée, stade de lésions cutanées multiples et stade viscéral KS suggère que cette relation est constante tout au long de la progression de la maladie KSLa relation linéaire entre plasma et PBMC KSHV ADN dans AIDS-KS suggère que les cellules infectées par le KSHV dans le compartiment circulatoire contribuent à la virémie KSHV Cette interprétation est cohérente avec la constatation que les cellules infectées par le KSHV dans le compartiment PBMC présentent des signes de réplication virale lytique Bien que la relation entre le compartiment circulatoire l’ADN de KSHV associé était significatif, les changements dans l’ADN des PBMC KSHV expliqués seulement ~% de la variation i La réplication lytique de KSHV à l’extérieur du compartiment circulatoire, c’est-à-dire le tissu lymphoïde et les contributions de la réplication virale lytique et latente à la virémie KSHV DNAKSHV associée au SIDA dans le SIDA, peuvent expliquer l’absence de corrélation plus forte entre le plasma et les PBMC. Le KS pourrait résulter d’une diminution du contrôle de la réplication du KSHV due à l’immunosuppression induite par le VIH ou à l’activation de la réplication du KSHV par la production de cytokines ou d’autres facteurs par les cellules infectées par le VIH. Les Zimbabwéens atteints de KS endémique VIH-séronégatif, comparés à ceux atteints du SIDA-KS qui avaient des charges tumorales similaires et des charges d’ADN de PBMC KSHV, soutiennent l’hypothèse selon laquelle l’infection par le VIH augmente la réplication du KSHV. Cas KS étudiés, il n’y avait pas de corrélation entre le nombre de lymphocytes CD et l’ADN plasmatique KSHV plaide contre une relation directe entre L’immunosuppression induite par le VIH et la virémie KSHV Nos résultats démontrent que la virémie KSHV est fréquente dans le KSHV avancé au Zimbabwe et suggère une relation entre la réplication lytique de KSHV et l’infection VIH non traitée Bien que nos données soutiennent un lien entre co-infection VIH et KSHV augmenté Les études sur les effets sur la réplication du KSHV de l ‘inhibition de la réplication du VIH par la multithérapie antirétrovirale sont nécessaires pour mieux comprendre ces relations.

Remerciements

Des analyses PCR en temps réel ont été effectuées par Uma Pugazenthi dans le Quantitative PCR Core Laboratory du Centre du cancer de l’Université du Colorado. Une analyse automatisée des séquences d’ADN a été effectuée au Centre de cancérologie de l’Université du Colorado. Biométrie, Centre des sciences de la santé de l’Université du Colorado, pour des conseils sur les analyses statistiques